Lacy Leadership

Success is Near

Kartoffeldestroseagar (PDA)

introduktion kartoffeldestroseagar ofte forkortet som PDA. De fleste mykologer bruger det i vid udstrækning som et generelt medium til gær og forme, der til en vis grad kan identificeres ud fra deres morfologiske træk, og deres pigmentering i kultur ofte er vigtig for identifikation af kulturer. PDA hjælper således med at dyrke og differentiere patogene […]

introduktion

kartoffeldestroseagar ofte forkortet som PDA. De fleste mykologer bruger det i vid udstrækning som et generelt medium til gær og forme, der til en vis grad kan identificeres ud fra deres morfologiske træk, og deres pigmentering i kultur ofte er vigtig for identifikation af kulturer. PDA hjælper således med at dyrke og differentiere patogene og ikke-patogene svampe.

princip

Kartoffeldestrosagar er et hyppigt anvendt mikrobielt vækstmedie til dyrkning af skimmelsvampe, gær og andre svampe. Det består af kartoffelinfusion og druesukker (alias glucose). Kartoffelinfusion og dekstrose som kulhydratkilde understøtter den frodige vækst af svampe og bakterier og observeres for at tilskynde til sporulation af skimmelsvamp og pigmentproduktion i visse dermatofytter. Medierne kan dog suppleres med selektive midler såsom syrer (f. eks. vinsyre) eller antibiotika (f. eks. chloramphenicol eller chlortetracyclin) for at hæmme væksten af bakterier, der kan hindre gær og skimmel. Agar fungerer som et størkningsmiddel.

i 2007, en artikel offentliggjort i FEMS Microbiology Letters, erklærede betydningen af kobber som suppliment til at opnå god farvning af svampekulturer på PDA medier. Forfatterne begrundede, at den tilstrækkelige mængde kobber er afgørende for aktiviteten af de stoffer, der er involveret i pigmentproduktion. De viste også, at der er en batch til batch variation i kobbermængde i både kommercielt tilgængelige og laboratoriefremstillede PDA-medier. For mere information følg referencen.

applikationer

  1. Kartoffeldestroseagar (PDA) anvendes almindeligvis i mejeriindustrien til påvisning af tilstedeværelsen af gær og forme i produktprøver. Til dette formål anbefales tilsætning af vinsyre.
  2. PDA suppleret med chlortetracyclin anbefales til mikrobiel optælling af gær og skimmel fra kosmetik.
  3. PDA suppleret med Chloramphenicol anbefales til selektiv dyrkning af svampe fra blandede prøver.
  4. PDA anvendes til isolering og optælling af gær og skimmelsvampe i kliniske prøver.
  5. stamkulturer af visse dermatofytter kan opretholdes på PDA-medier.
  6. PDA bruges også til at stimulere sporulation og differentiere typiske sorter af dermatofytter baseret på deres pigmentproduktion.

pH

pH af Kartoffeldestrose Agar medium er omkring 5.6+/- 0.2. Brug HCl og KOH til pH-justering.

Composition

Composition for PDA media with potato infusion

Ingredients For 100mL For 500mL For 1000ml
Potato (infusion form) 20 gm 100 gm 200 gm
Dextrose 2 gm 10 gm 20 gm
Agar-Agar 1.5 gm 7.5 gm 15 gm
Distilled water Upto 100mL Upto 500mL Upto 1000mL

Composition for PDA media with commercially available potato infusion powder

Ingredients For 100mL For 500mL For 1000ml
Potato extract 0.4 gm 2 gm 4 gm
Dextrose 2 gm 10 gm 20 gm
Agar-Agar 1.5 gm 7.5 gm 15 gm
destilleret vand op til 100 ml op til 500 ml op til 1000 ml

forberedelse af kartoffelinfusion

trin involveret i tilberedning af kartoffelinfusion:

  1. Tag 200 g kartoffel til 1 liter PDA-medieforberedelse.
  2. vask kartoflen for at fjerne snavs.
  3. skræl huden af og terning dem.
  4. tilsæt stykkerne til 1 liter destilleret vand.
  5. kog i 20-25 minutter på en varm plade.
  6. Saml ekstraktet gennem muslin-kluden.

forberedelsen af medierne ved hjælp af ovenstående råmaterialer er ret kedelig. Derfor erstattes den infunderede form af kartoffel i nyere tid med kommercielt tilgængeligt kartoffelstivelse/ekstraktpulver.

4 g af kartoffelekstraktpulveret svarer til 200 g kartoffelinfusion.

reagenser

sammen med de reagenser, der er nævnt i tabellen

  • 1N KOH
  • 1N HCl

instrumenter og andre krav

  • glasbæger
  • konisk kolbe / Erlenmeyer kolbe
  • spatel
  • målecylinder
  • ph meter
  • VEJEBALANCE
  • destilleret vand
  • smørpapir
  • magnetisk omrører og pellet
  • pipetter og tip
  • Petri plader og/eller reagensglas
  • varmeplade

procedure

  1. vejer ingredienserne separat med hensyn til mængden af medierne. (Her overvejer vi 1L af medierne).
  2. Opslæm ingredienserne såsom kartoffelinfusion (200 g) eller kartoffelekstrakt (4 g) og glucose (alias druesukker) 20 g i et glasbæger, der indeholder ca.900 ml ddH2O.
  3. opløs komponenterne i bægeret ved hjælp af en magnetisk omrører. (Varme kan påføres for at opløse mediet fuldstændigt).
  4. Juster mediumets pH til 5,6 ved hjælp af 0,1 N HCl og 0,1 N KOH.
  5. Juster bouillonen til et slutvolumen på 1L ved hjælp af ddH2O.
  6. Overfør bouillon til konisk kolbe eller alikvot i mindre volumener.
  7. Tilføj nu agar i overensstemmelse hermed med hensyn til medievolumen (dvs.15 gms agar for 1L af medierne., 3,75 gm til 250 ml).
  8. Luk mundingen af kolben med en bomuldsprop. Forsegl det yderligere med papir og gummibånd.
  9. autoklave i 20 minutter ved 15 psi (1,05 kg/cm2) på væskecyklus.
  10. hvis antibiotika skal medtages, skal deres stamopløsninger dog filtersteriliseres inden tilsætning til medierne. Disse antibiotika skal tilsættes, efter at mediet er afkølet til omkring 45-50 liter.
  11. nogle formuleringer foretrækker tilsætning af steril vinsyre (10%) i stedet (eller i kombination) af antibiotika. Vinsyre nedsætter pH-værdien til ca.3,5. Den nedsatte pH hæmmer bakterievækst.
  12. bland godt og hæld i sterile Petriplader eller rør til skrå.

Alternativt kan de kommercielt tilgængelige kartoffeldestrose-mediepulvere anvendes. Vej blandingen af indhold som foreskrevet af producenten.

opbevaring

opbevares i mørke ved 2-8 liter. Plader kan bruges i en uge, når de opbevares i et rent sterilt område.

forsigtig

opvarmning af Kartoffeldestroseagar efter forsuring bør undgås, da det kan hydrolysere agaren og ødelægge størkningsegenskaberne.

begrænsninger

da PDA er et generelt formål og ikke et differentieret medium, er kun formodet identifikation mulig ved at observere kolonimorfologi. Mikroskopisk undersøgelse og biokemiske test bør følges for at identificere isolater til Slægt og arter.

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.