Lacy Leadership

Success is Near

bramborový Dextrózový Agar (PDA)

Úvod bramborový dextrózový agar často zkráceně jako PDA. Většina mykologů ji široce používá jako univerzální médium pro kvasinky a plísně, které lze do určité míry identifikovat na základě jejich morfologických rysů a jejich pigmentace v kultuře, která je často důležitá pro identifikaci kultur. PDA tak pomáhá při kultivaci a diferenciaci patogenních a nepatogenních hub. princip […]

Úvod

bramborový dextrózový agar často zkráceně jako PDA. Většina mykologů ji široce používá jako univerzální médium pro kvasinky a plísně, které lze do určité míry identifikovat na základě jejich morfologických rysů a jejich pigmentace v kultuře, která je často důležitá pro identifikaci kultur. PDA tak pomáhá při kultivaci a diferenciaci patogenních a nepatogenních hub.

princip

agar bramborové dextrózy je často používané mikrobiální růstové médium pro pěstování plísní, kvasinek a jiných hub. Skládá se z infuze brambor a dextrózy (také znám jako glukóza). Infuze brambor a dextróza jako zdroj uhlohydrátů podporují bujný růst hub a bakterií a je pozorováno, že podporují sporulaci plísní a produkci pigmentu v určitých dermatofytech. Média však mohou být doplněna selektivními látkami, jako jsou kyseliny (např. kyselina vinná) nebo antibiotika (např. chloramfenikol nebo chlortetracyklin) k inhibici růstu bakterií, které mohou bránit kvasinkám a plísním. Agar působí jako zpevňující činidlo.

v roce 2007 článek publikovaný v FEMS Microbiology Letters uvedl význam mědi jako doplňku k dosažení dobrého zbarvení houbových kultur na PDA médiích. Autoři usoudili, že dostatečné množství mědi je nezbytné pro aktivitu enzymů podílejících se na produkci pigmentu. Rovněž ukázali, že v komerčně dostupných i laboratorně vyráběných médiích PDA existuje změna množství mědi v dávce k dávce. Pro více informací postupujte podle odkazu.

aplikace

  1. bramborový Dextrózový Agar (PDA) se běžně používá v mlékárenském průmyslu pro detekci přítomnosti kvasinek a plísní ve vzorcích produktů. Za tímto účelem se doporučuje přidání kyseliny vinné.
  2. PDA doplněná chlortetracyklinem se doporučuje pro mikrobiální výčet kvasinek a plísní z kosmetiky.
  3. PDA doplněná chloramfenikolem se doporučuje pro selektivní kultivaci hub ze smíšených vzorků.
  4. PDA se používá k izolaci a výčtu kvasinek a plísní v klinických vzorcích.
  5. zásobní kultury určitých dermatofytů mohou být udržovány na PDA médiích.
  6. PDA se také používá pro stimulaci sporulace a diferenciaci typických odrůd dermatofytů na základě jejich produkce pigmentu.

pH

pH agarového média bramborové dextrózy je asi 5.6+/- 0.2. Pro úpravu pH použijte HCl a KOH.

Composition

Composition for PDA media with potato infusion

Ingredients For 100mL For 500mL For 1000ml
Potato (infusion form) 20 gm 100 gm 200 gm
Dextrose 2 gm 10 gm 20 gm
Agar-Agar 1.5 gm 7.5 gm 15 gm
Distilled water Upto 100mL Upto 500mL Upto 1000mL

Composition for PDA media with commercially available potato infusion powder

Ingredients For 100mL For 500mL For 1000ml
Potato extract 0.4 gm 2 gm 4 gm
Dextrose 2 gm 10 gm 20 gm
Agar-Agar 1.5 gm 7.5 gm 15 gm
destilovaná voda do 100 ml do 500 ml do 1000 ml

příprava infuze brambor

kroky spojené s přípravou infuze brambor:

  1. vezměte 200 gm brambor na 1 L přípravy média PDA.
  2. brambory umyjte, abyste odstranili nečistoty.
  3. odloupněte kůži a kostky.
  4. přidejte kousky do 1 L destilované vody.
  5. vařte 20-25 minut na horké desce.
  6. Sbírejte extrakt přes mušelínovou látku.

Příprava média použitím výše uvedených surovin je poměrně zdlouhavá. Proto se v poslední době infuzní forma brambor nahrazuje komerčně dostupným práškem bramborového škrobu / extraktu.

4 gm prášku z bramborového extraktu odpovídá 200 g bramborové infuze.

činidla

spolu s činidly uvedenými v tabulce

  • 1N KOH
  • 1N HCl

Nástroje a další požadavky

  • skleněná kádinka
  • Kuželová baňka / Erlenmeyerova baňka
  • špachtle
  • odměrka
  • pH metr
  • váha váhy
  • destilovaná voda
  • máslový papír
  • magnetické míchadlo a pelety
  • pipety a špičky
  • Petriho desky a/nebo zkumavky
  • horká deska
  • postup

  1. vážit složky odděleně s ohledem na objem média. (Zde uvažujeme o 1L médií).
  2. Suspendujte přísady, jako je bramborová infuze (200 gm) nebo bramborový extrakt (4 gm) a glukóza (aka dextróza) 20 gm ve skleněné kádince obsahující asi 900 ml ddH2O.
  3. rozpusťte složky v kádince pomocí magnetického míchadla. (Teplo může být aplikováno na úplné rozpuštění média).
  4. nastavte pH média na 5,6 pomocí 0,1 N HCl a 0,1 N KOH.
  5. upravte vývar na konečný objem 1L pomocí ddH2O.
  6. přeneste vývar do kónické baňky nebo alikvotu do menších objemů.
  7. Nyní přidejte agar odpovídajícím způsobem s ohledem na objem média (tj., 3,75 gm pro 250 ml).
  8. uzavřete ústa baňky bavlněnou zátkou. Utěsněte jej dále papírem a gumičkou.
  9. autokláv po dobu 20 minut při 15 psi (1,05 kg / cm2) v cyklu kapaliny.
  10. pokud však mají být zahrnuta antibiotika, jejich zásobní roztoky by měly být před přidáním do média filtrovány. Tato antibiotika musí být přidána po ochlazení média na přibližně 45-50ºC.
  11. některé formulace upřednostňují přidání sterilní kyseliny vinné (10%) místo (nebo v kombinaci) antibiotik. Kyselina vinná snižuje pH na přibližně 3,5. Snížené pH inhibuje růst bakterií.
  12. dobře promíchejte a nalijte do sterilních Petriho destiček nebo zkumavek pro sklon.

alternativně lze použít komerčně dostupné práškové agarové médium bramborové dextrózy. Směs obsahu se naváží podle pokynů výrobce.

skladování

uchovávejte ve tmě při 2-8ºC. Desky mohou být použity po dobu jednoho týdne, pokud jsou skladovány v čisté sterilní oblasti.

upozornění

zahřívání bramborového Dextrózového agaru po okyselení je třeba se vyvarovat, protože může agar hydrolyzovat a může zničit tuhnoucí vlastnosti.

omezení

protože PDA je univerzální a ne diferenciální médium, je možná pouze předpokládaná identifikace pozorováním morfologie kolonie. Je třeba dodržovat mikroskopické vyšetření a biochemické testy k identifikaci izolátů rodu a druhu.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.